1. Наименование: Республиканская референс лаборатория (РРЛ) Национального центра фтизиатрии Министерства здравоохранения Кыргызской республики

2. Адрес: г.Бишкек, улица Ахунбаева, 90 а

3. Время работы лаборатории: пн-сб, с 8.00-18.00

4. Прием образцов: В лаборатории ведется ежедневно с 07.30 до 17.00

5. Телефон РРЛ 0 (312) 51 43 93

 

6. РРЛ проводит все лабораторные исследования на туберкулез в строгом соответствии с утвержденным диагностическим алгоритмом

Диагностические методы

Основная цель лабораторной диагностики ТБ является выделение возбудителя ТБ с определением лекарственной чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам. Выделение возбудителя ТБ возможно как прямыми методами с получением живой культуры МБТК, так и косвенными методами, которые детектируют его наличие в диагностическом образце (напр., молекулярные маркеры микобактерий).

В настоящее время лабораторные методы диагностики ТБ имеют два основных направления - фенотипическое исследование и молекулярно-генетическое диагностического материала.

Фенотипические методы направлены на определение совокупности внешних биологических признаков микобактерий туберкулеза, таких как внешний вид микроорганизма, ростовые свойства, лекарственная чувствительность к антибиотикам. Наиболее значимым моментом при использовании фенотипических методов диагностики ТБ является получение жизнеспособного штамма возбудителя заболевания. К таким методам относится посев на питательных средах и фенотипическое тестирование лекарственной чувствительности (фТЛЧ). Микроскопические методы детекции ТБ относятся к фенотипическим, но не позволяют определять жизнеспособность выделенного возбудителя.

Генетические методы позволяют выявить молекулярные маркеры микобактерий туберкулеза, такие как

• видоспецифические участки бактериальной ДНК,

• определение мутаций в ДНК, связанных с устойчивостью к ПТП.

Молекулярно-генетические методы (МГМ) позволяют определить наличие МБТК в образце, видовую принадлежность микроорганизма и вероятность наличия или отсутствия устойчивости к противотуберкулезным препаратам (ПТП). К МГМ относится Xpert MTB/RIF и, так называемый, хайн-тест. Xpert MTB/RIF тест является ПЦР методом, позволяющим проводить детекцию микобактерий туберкулезного комплекса в образце диагностического материала и выявлении маркеров устойчивости к рифампицину. Хайн-тест относится к группе методов линейных зондов (Line Probe Assays, LPA). Диагностические наборы хайна позволяют определить наличие в пробе ДНК МБТК и определить наличие либо отсутствие маркеров резистентности к ПТП основного и резервного ряда.

Методы бактериологической диагностики ТБ представлены в Таблице 1.

Внимание: Все проводимые анализы в лаборатории проводятся бесплатно!

Таблица 1. Методы диагностики ТБ проводимые в РРЛ НЦФ МЗ КР

Тип	Метод	Функциональные возможности метода
Фенотипические методы	Световая и флуоресцентная микроскопия (Циль-Нильсен, аурамин)	Наличие кислотоустойчивых бактерий КУБ в диагностическом образце
	Посев на плотных и жидких питательных средах (ЛЙ, MGIT)	Выделение микобактерий из диагностического образца
	фТЛЧ (метод пропорций на ЛЙ, MGIT)	Определение ТЛЧ к 1 и 2 ряду ПТП
Молекулярно-генетические методы	Xpert MTB/RIF Xpert MTB/RIF Ultra Xpert MTB XDR	Идентификация МБТК; Определение ЛУ к RIF   Определение ЛУ к RIF,INH, фторхинолонам и инъекционным препаратам
	GenoType®MTBDRplus ver.2.0	Идентификация МБТК; Определение ТЛЧ к рифампицину и изониазиду.
	GenoType®MTBDRsl ver.2.0	Идентификация МБТК; Определение ТЛЧ к фторхинолонам и инъекционным препаратам второго ряда
	GenoType®Mycobacterium CM/AS	Видовая идентификация НТМ
	GenoType® MTBC	Идентификация вида внутри МБТК
	Секвенирование генома микобактерий туберкулеза	Идентификация МБТ, определение чувствительности к антибиотикам
Иммунохроматрографический метод	Идентификационный тест  (SD TB Ag MPT64)	Идентификация МБТК от НТМ

 

Проведение тестирования некачественных образцов (напр., слюна) повышает вероятность ложноотрицательных результатов исследований либо получения ошибок тестов в автоматизированных диагностических системах.

7. Виды диагностического материала

Тип биологического материала напрямую влияет на выбор диагностического теста. При этом лаборатория оценивает возможность проведения прямого или непрямого метода тестирования. При прямом методе для тестирования используется или сам диагностический материал, или осадок, полученный во время процедуры посева данного образца. При непрямом методе используется культура микобактерий туберкулеза, выросшая на жидкой или плотной питательной среде. В таблице 2 представлен перечень возможного диагностического материала для каждого используемого теста.

Мокрота

Внимание: Сбор мокроты на территории лаборатории запрещен!

Основные требования:

• Сбор мокроты должен проводиться только под присмотром медработника, назначенного администрацией учреждения.

• Процедура сбора мокроты должна проводиться в специально оборудованной комнате (кабине) для сбора мокроты,           оснащенной бактерицидной ультрафиолетовой лампой, с хорошей вентиляцией, под непосредственным контролем     медицинского персонала с обязательным проведением инструктажа о правилах сбора мокроты. Если условия этого не   позволяют, то сбор мокроты проводят вне помещения (на открытом воздухе);

• Сбор материала для диагностических исследований необходимо производить до начала химиотерапии;

• Материал для исследования должен собираться рано утром;

• При исследовании мокроты желательно собрать 2-3 пробы утренней мокроты в течение 2-3 последовательных дней;

• Собранные образцы мокроты от одного пациента не объединяют в одном флаконе, а направляют в лабораторию с указанием сведений о пациенте для каждой пробы.

• Достаточный объем исследуемой порции мокроты составляет 3-5 мл, однако допустимо исследование и меньших по объему порций.

• Качественным материалом является слизистая или слизисто-гнойная мокрота, которая может содержать включения белесоватого, желтого, серого или бурого цвета (см. СОП KGZ-NRL-SOP-A-039).

При отсутствии возможности доставки образцов мокроты для бактериоскопического исследования (нативная микроскопия) возможно приготовить и доставить в лабораторию зафиксированные мазки.

Индуцированная мокрота

Исследование этого материала проводится в случае невозможности самостоятельного сбора мокроты пациентом. Для аэрозольных ингаляций пользуются портативными или стационарными аэрозольными ингаляторами.

Индуцированная, т.е. полученная при аэрозольных ингаляциях, мокрота напоминает по внешнему виду и консистенции слюну. Во избежание выбраковки материала в бланке направления и на флаконе с материалом должна быть обязательная маркировка, указывающая на то, что материал получен после аэрозольной ингаляции (напр., «индуцированная мокрота»).

Промывные воды желудка (ПВЖ)

ПВЖ исследуют преимущественно у детей младшего возраста, которые плохо откашливают мокроту и часто проглатывают ее. Во избежание смешивания проглоченной мокроты с пищей промывные воды желудка следует брать натощак. Последний прием пищи должен быть не менее чем за 12 часов до взятия промывных вод желудка.

Перед сбором материала пациенту дают выпить 100–150 мл стерильной воды. Полученный материал нейтрализуют добавлением 100 мг натрия бикарбоната, немедленно доставляют в лабораторию и подвергают обработке, чтобы исключить повреждающее действие на микобактерии содержащихся в материале желудочных ферментов.

Другие виды диагностического материала

При внелегочных формах процесса можно выделить 2 группы диагностических материалов:

• асептически полученный материал;

• заведомо загрязненный материал;

К асептически собранному материалу относятся резецированные ткани, кровь, гной из холодных абсцессов, грануляции, соскобы синовиальных оболочек, лимфатические узлы или пунктаты, их содержимое, плевральная, спинномозговая, синовиальная или асцитическая жидкость.

Материал помещают в стерильный флакон без консервантов и немедленно доставляют в лабораторию. Во избежание образования в образце сгустков (например, в плевральной или асцитической жидкости), рекомендуется добавить к биологическому материалу в момент его сбора цитрат натрия.

Если такой операционный материал, как ткани, лимфоузлы или пунктаты, не может быть немедленно доставлен в лабораторию, во избежание высыхания к нему добавляют небольшое количество (1-3 мл) стерильного изотонического раствора и помещают в холодильник при 2-8°С.

Заведомо контаминированные образцы из открытых очагов поражения, в отношении которого заранее известно, что он загрязнен сопутствующей микробной флорой или собран без соблюдения правил асептики.

Мочу (среднюю часть утренней порции, не менее 200 мл) собирают в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов. Анализ мочи на микобактерии должен предусматривать обязательное трехкратное исследование. Моча доставляется в лабораторию в тот же день, использование консервантов не допускается.

Менструальная кровь и каловые массы не являются адекватным диагностическим материалом для исследования на туберкулез; каловые массы рекомендуется исследовать только на нетуберкулезные микобактерии (НТМ) у иммунокомпроментированных пациентов.

Таблица 2. Виды диагностического материала для лабораторных исследований

Тип	Метод	Материал
Фенотипические методы	Микроскопия	Мокрота Остальные виды образцов – микроскопия осадка при проведении посева. Кроме крови и кала
	Посев на плотных и жидких питательных средах (ЛЙ, MGIT)	Любой диагностический материал после проведения процедуры деконтаминации и центрифугирования. Кроме крови и кала
	фТЛЧ (метод пропорций на ЛЙ, MGIT)	Культура МБТ, выросшая по питательных средах
Молекулярно-генетические методы	Xpert MTB/RIF	Любой диагностический материал после проведения процедуры деконтаминации и центрифугирования. Кроме крови и кала
	GenoType®MTBDRplus ver.2.0 GenoType®MTBDRsl ver.2.0	Мокрота с результатом микроскопии КУБ 2+,3+ после проведения процедуры деконтаминации и центрифугирования; Культура МБТ, выросшая по питательных средах
	GenoType®Mycobacterium CM/AS	Культура МБТ, выросшая по питательных средах
	GenoType® MTBC	Культура МБТ, выросшая по питательных средах
	Иммунохроматрографические методы (ID тест)	Культура МБТ, выросшая по питательных средах

 

8. Лаборатория не принимает диагностические образцы в следующих случаях:

1. Контейнер с образцом имеющий трещины/разломы, протекает или негерметично закрыт;

2. Контейнер с образцом не промаркирован или промаркирована только крышка;

3. Несовпадение идентификационного номера образца на контейнере с направлением и/или сопроводительным листом;

4. Если направление, прилагаемое к образцу, и/или сопроводительный лист:

    o отсутствует;

    o заполненно не полностью или некорректно;

    o использовалась неутвержденная форма направления;

5. Задержки в транспортировке (если образец получен более 3 дней назад);

6. Нарушение условий транспортировки (температурный режим, отсутствие транспортировочного контейнера, др.);

7. Если доставлена слюна;

8. Недостаточное количество/отсутствие материала;

9. Несоответствующий контейнер;

10. Незарегистрированные анализы в базе данных;

11. Мазок из зева принимается исключительно только оперированных лиц.

 

9. Выдача результатов

Основные правила выдачи результатов:

1. Прием и доставку выданных результатов исследований может проводить только медицинский персонал медицинских учреждений и отделений НЦФ, отправляющих образцы на исследования.

2. Результаты исследований появляются в базе информационной системе управления лабораторными данными (ИСУЛД) в день валидации лабораторией и доступно для лечащего врача.

3. Результаты исследований выдаются в бумажном виде, медицинским учреждениям где не установлена база ИСУЛД. Выдача результатов тестирования по персональной электронной почте и мобильным приложениям (Viber, WhatsApp, и др.) запрещена. По телефону возможно сообщение критических результатов исследований или единичных результатов по обоснованной необходимости. Лаборатория может сообщать о результатах единичных исследований по телефону только:

• врачу-фтизиатру, отправившему образцы на тестирование;

• врачу-фтизиатру, проводящему лечение конкретного пациента;

• администрации лечебного учреждения, отправившей образцы на тестирование.

4. Выдача результатов исследований пациентам, их родственникам и другим частным лицам запрещена.

5. Для подтверждения передачи результатов исследований, медицинский сотрудник, забирающий направления с результатами тестов, должен подписаться с указанием фамилии в лабораторном журнале выдачи результатов.

Время получения результатов

Время получения результатов теста напрямую зависит от специфики процедуры и биологических особенностей микроорганизма. Так, микобактерии туберкулезного комплекса относятся к медленно растущим микроорганизмам, что существенно увеличивает время получения конечных результатов диагностических тестов (посева и ТЛЧ). В то же время молекулярно-генетические методы диагностики ТБ значительно сокращают время диагностического процесса. Оценочное время получения результатов тестов представлено в Таблице 3.

 

Таблица 3. Оценочное время получения результатов тестов

Тип исследования	Наименование исследования	Максимальное время получения результата теста (от даты регистрации образца в лаборатории, рабочие дни)
Микроскопическое исследование	Нативная микроскопия мокроты (прямой метод)	24 часа
	Микроскопия осадка (прямой метод)	24 часа
Посев	Плотная среда (ЛЙ) (прямой метод)	до 56 дней (отрицательный результат)
	Жидкая среда (MGIT) (прямой метод)	до 42 дня (отрицательный результат)
ТЛЧ	Плотная среда (ЛЙ) (непрямой метод)	до 30 дней; общее время от первичного посева – до 80 дней
	Жидкая среда (MGIT) (непрямой метод)	до 15 дней; общее время от первичного посева – до 50 дней
МГМ	MTBDRplus/sl (прямой/непрямой метод)	до 5 дней
	Xpert MTB/Rif (прямой метод)	24 часа

 

Жалобы и отзывы

Уважаемые клиенты,

Просим Вас оставлять свои отзывы или жалобы на сайте НЦФ https://tbcenter.kg/, в специальном журнале в регистратуре, или по телефону 0312 51 43 93.

Все Ваши жалобы и отзывы, поступающие в лабораторию, будут рассмотрены в течение пяти рабочих дней руководством лаборатории. Будут приняты необходимые меры для решения проблемы вместе с сотрудником, ответственным за область жалобы или отзыва. Пожалуйста, обратитесь за результатами в регистратуру. В случае анонимного обращения результаты остаются в лаборатории, из-за невозможности передачи автору.

 

Intellectual Property of IML Gauting, Germany